Tincion de Pas Kit.

TINCIÓN DE PAS

Kit de Tinción para microscopia

Uso Previsto:

• La Tinción de PAS  es un procedimiento aplicable a cortes o secciones de tejidos parafinados, frotis de sangre, improntas de tejidos o extendidos citológicos, para la determinación de glucógeno, mucinas, mucopolisacáridos, hidratos de carbono y linfocitos, mediante una reacción cromática.
• La aplicación de esta técnica de tinción es parte fundamental de paneles de tinciones histoquímicas tanto dentro del área diagnostica de histopatologías humanas, animales como en el campo de la investigación.
• Dentro de las patologías más comunes de aplicación podemos nombrar: leucemia linfocítica, patologías hepáticas, renales, musculares y de piel.
• Mediante la Tinción de PAS también es posible la demostración de microorganismos fúngicos en cortes o secciones de tejidos parafinados.

Principio:

• El mecanismo de acción del Reactivo según Schiff consiste en una previa oxidación de los glicoles presentes en la  muestra tratada mediante la aplicación del Acido Periódico (Solución A).
• Luego estos componentes reaccionan con la fucsina básica del Reactivo según Schiff (Solución B), tiñéndolos de un color rojo magenta.
• Mediante una digestión previa opcional con diastasa (α-amilasa) puede utilizarse para el diagnóstico de enfermedades relacionadas con el almacenamiento de glicógeno.

 Procedencia de las muestras:

• Tinción de PAS se aplica frecuentemente en cortes histológicos de muestras de tejidos fijados, procesados e incluidos en parafina.
• Puede emplearse también sobre extendidos citológicos, frotis de sangre o médula ósea o material clínico citológico como sedimentos urinarios, esputos, frotis tomados de punciones aspirativas (Paaf), líquidos de lavados e improntas de tejidos.

Recolección de muestras:

• Se recomienda que la recolección de muestras se realice de acuerdo con las guías y estándares locales de procedimientos de laboratorios.
• Todos los derivados sanguíneos o de muestras de tejidos deben considerarse potencialmente infecciosos.
• Los manuales de procedimientos de histología estándar proporcionan todos los detalles necesarios para la recolección de muestras y el almacenaje de las mismas.

Contenido del Kit:

• Solución A:  Acido Periodico Solución al 1%
• Solución B:  Reactivo Según Schiff
• Ambos reactivos  “listos para usar”

Modo de uso:

Procedimiento para cortes o secciones de tejidos parafinados:

1. Desparafinar con Xileno o Sustituto del Xileno Bioclear, dos cambios de 15 minutos cada uno.
2. Hidratar los cortes con sucesivos pasajes por alcoholes (Alcohol Etílico absoluto y Alcohol Etílico 96º) o deshidratantes (Deshidratante 100º / 90º / 80º), con graduación decreciente terminando con un lavado por inmersión en Agua desmineralizada, durante 2 a 3 minutos. (1*)
3. Oxidar con Solución A durante 10 minutos a temperatura ambiente.
4. Lavar con Agua desmineralizada, 3 o 4 cambios.
5. Realizar tinción con Solución B durante 15 minutos a temperatura ambiente.
6. Lavar en agua corriente común durante 5 minutos.
7. Lavar con Agua desmineralizada durante 1 minuto.
8. Contrastar con Hematoxilina de Harris solución o Hematoxilina de Gill (II) solución, durante 30 segundos.
9. Virar en agua corriente durante 5 minutos.
10. Deshidratar los cortes con sucesivos pasajes por alcoholes (Alcohol Etílico 96º y Alcohol Etílico absoluto) o deshidratantes (Deshidratante 80º / 90º / 100º), con graduación creciente, durante 2 a 3 minutos. (2*)

Aclarar mediante 2 inmersiones sucesivas en  Xileno p.a. o Sustituto del Xileno, y dejar las muestras aclarando durante al menos 3 minutos.

2. Montar con Bálsamo de Canadá Sintético.

Resultados:

• Estructuras PAS Positivas: Magenta
• Núcleos celulares: Azul

Notas:

(1*) Sucesivos pasajes, refiere a : una inmersión en Deshidratante 100° Uso Histológico o Alcohol Etílico absoluto p.a., una inmersión en Deshidratante 90° Uso Histológico o Alcohol Etílico 96º p.a., una inmersión en Deshidratante 80° Uso Histológico o Alcohol Etílico 96º p.a y una inmersión de al menos 2 minutos en Agua desmineralizada.

(2*) Sucesivos pasajes, refiere a: una inmersión en Deshidratante 80° Uso Histológico o Alcohol Etílico 96º p.a., una inmersión en Deshidratante 90° Uso Histológico o Alcohol Etílico 96º p.a., una inmersión en Deshidratante 100° Uso Histológico o  Alcohol Etílico absoluto p.a.

Procedimiento para frotis de sangre, improntas de tejidos o extendidos citológicos:

1. Realizar los frotis o extendidos y rociar con fijador en spray Pathofix Fijador Citológico durante 5 minutos.
2. Lavar con Agua desmineralizada y luego incubar con Solución A durante 10 minutos.
3. Lavar nuevamente con Agua desmineralizada, 3 o 4 cambios.
4. Incubar con Solución B durante 15 minutos a temperatura ambiente.
5. Lavar en agua corriente común durante 5 minutos.
6. Lavar con Agua desmineralizada durante 1 minuto.
7. Contrastar con Hematoxilina de Harris Solución o Hematoxilina de Gill (II) Solución durante 30 segundos.
8. Virar en agua corriente durante 5 minutos.
9. Deshidratar con alcoholes (Alcohol Etílico 96º y Alcohol Etílico absoluto) o deshidratantes (Deshidratante 80º / 90º / 100º uso histológico) crecientes en graduación, en sucesivos pasajes (*2).
10. Aclarar mediante 2 inmersiones sucesivas en Xileno p.a. o Sustituto del Xileno Bioclear, dejar las muestras aclarando durante al menos 3 minutos.
11. Montar con Bálsamo de Canadá Sintético.

Resultados:

• Estructuras PAS Positivas: Magenta
• Núcleos celulares: Azul

Notas:

• (2*) Sucesivos pasajes, refiere a: una inmersión en Deshidratante 80° Uso Histológico o Alcohol Etílico 96º p.a.,
• una inmersión en Deshidratante 90° Uso Histológico o Alcohol Etílico 96º p.a., una inmersión en
• Deshidratante 100° Uso Histológico o  Alcohol Etílico absoluto p.a.

Diagnóstico: 

• El microscopio usado debería corresponder a los requisitos de un laboratorio de diagnóstico médico.
• Los diagnósticos y evaluaciones las deben realizar solo personas autorizadas y calificadas.
• Siempre es recomendable el uso de controles de tinción apropiados para descartar resultados erróneos.

Almacenamiento y estabilidad:

• Almacenar el producto en envase cerrado (sin usar), a temperatura ambiente menor de 25ºC y al abrigo de la luz.
• Para lograr una óptima estabilidad de los componentes del Kit Tinción de PAS, una vez abiertos los envases, conservar en refrigerador entre 2ºC a 8°C .
• Mantenga bien cerrados los envases y dentro de la caja contenedora.
• Utilice el producto hasta la fecha de caducidad indicada en el envase.

Solamente para uso profesional:

• La aplicación de este tipo de reactivos debe ser realizada por personal especializado.
• El usuario deberá cumplir las directivas nacionales sobre seguridad en el trabajo y aseguramiento de la calidad.
• Protección contra infecciones:
• El usuario debe considerar el uso de equipamiento de protección personal eficaz contra infecciones de acuerdo con las directivas de trabajo en laboratorio.

Indicaciones para la eliminación de residuos

• El envase debe ser eliminado de acuerdo con las directivas válidas de eliminación de residuos.
• Las soluciones usadas y las soluciones caducas deben eliminarse como desecho peligroso, debiéndose cumplir las directivas locales de eliminación de residuos.
• Clasificación de sustancias peligrosas:
• Tener en cuenta la clasificación de substancias peligrosas en la etiqueta del producto y las indicaciones en la ficha de datos de seguridad. La ficha de seguridad está disponible en el sitio web https://www.stanton.com.ar/
• Todos nuestros productos cuentan con su correspondiente ficha técnica y de seguridad, disponibles en forma on line:  https://www.stanton.com.ar/index.html

Bibliografia:

1. Routine Cytological Staining Techniques: Theoretical Background and Practice. Author(s): Mathilde E. Boon, Johanna S. Drijver (auth.). Publisher: Macmillan Education UK, Year: 1986
2. Métodos Histotecnológicos. Instituto de patología de las Fuerzas Armadas de los EEUU (AFIP). ed. (1992).
3. Raimundo García del Moral, “Laboratorio de Anatomía Patológica”

Indicación al consumidor:

• El producto está garantizado por el fabricante hasta su fecha de vencimiento si se lo transporta y almacena en las condiciones prescriptas.
• Ante cualquier consulta, el fabricante puede ser contactado personalmente, por email o por teléfono o ingresando en www.stanton.ar  solapa de contacto.

USOS ANALITICOS

• Aplicable en cortes histológicos o en frotis de sangre y medula osea. Destinada para a la tincion de linfocitos, mucopolisacaridos y hongos.
• Tincion intesa y definida de color ROJO PURPURA